RACE技術服務

　　實驗介紹RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通過PCR進行cDNA末端快速克隆的技術。本公司可對有polyA尾和5’帽子結構的真核生物mRNA進行相應的RACE分析。進行RACE實驗需至少有200bp以上的已知序列。

 

　　3’RACE原理：用帶有特殊接頭的逆轉錄引物對總RNA進行逆轉錄，根據逆轉錄引物上的接頭序列和mRNA已知序列設計引物即可擴增出3’末端序列。

 

　　5’RACE原理：將5’末端的帽子結構去掉后，mRNA5’末端即暴露出磷酸基團。用T4 RNA連接酶在mRNA5’末端連接特異性接頭。反轉錄后，根據接頭序列和mRNA已知序列設計引物對反轉錄產物擴增，即可擴增出mRNA5’末端的序列。

 

　　cDNA末端快速擴增技術 (rapid amplification of cDNA ends, RACE)，是運用PCR技術，在僅知目標基因部分序列片段的基礎上，從轉錄本中快速擴增其cDNA的5’和3’末端的有效方法。主要應用于全長基因獲取、轉錄起始位點的位置、轉錄調控區域、miRNA/lncRNA靶標驗證。

 

　　關鍵因素：RACE實驗成功的關鍵在于高質量與完整性好的RNA以及特異性強的引物，我們有專業的技術員能夠完成以上的任務。

 

　　交付結果：擴增全長片段測序報告；擴增的全長片段的電泳圖；含全長片段的質粒及菌液。

 

　　交付時間：大約15-25個工作日

 

　　服務項目

 

　　服務流程3‘RACE實驗

 

　　根據已知序列設計帶接頭的逆轉錄引物及巢式PCR引物

 

　　高質量RNA提取

 

　　用帶接頭的逆轉錄對mRNA進行逆轉錄

 

　　槽式PCR擴增3’末端序列，并電泳檢測

 

　　將PCR產物送測序公司測序或連接T載體后測序

 

　　5‘RACE實驗

 

　　根據已知序列設計巢式PCR引物

 

　　高質量RNA提取

 

　　去磷酸化處理

 

　　“去帽子”反應

 

　　5’RACE Adaptor的連接

 

　　逆轉錄反應

 

　　巢式PCR擴增5’末端序列

 

　　將PCR產物送測序公司測序或連接T載體后測序

 

　　樣本要求1、需提供新鮮組織或活細胞樣本。如果提供RNA樣本，需要高質量無降解RNA片段。

 

　　2、組織或RNA樣本需干冰或液氮運輸。細胞樣本常溫運輸。

 

　　3、需提供至少200bp已知序列，且已知序列需與mRNA序列一致，不能是與mRNA互補序列，否則RACE實驗可能無法完成。

 

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