lncRNA，miRNA和mRNA關聯分析

　　1實驗介紹人類基因組測序結果分析表明，全基因組中能夠編碼蛋白質的DNA 僅占有很少一部分，絕大部分為不編碼蛋白質的DNA，這些DNA轉錄形成的產物即為非編碼RNA。非編碼RNA（包含microRNA和long no-coding RNA）在細胞分化和代謝等生命活動中扮演著舉足輕重的作用。lncRNA 與miRNA 之間可通過相互調控來影響腫瘤的發生發展。由于多數lncRNA的結構與mRNA 具有一定的相似性，提示miRNA可能通過類似于mRNA 的作用機制負性調控lncRNA 的表達，進而發揮一系列生物學作用。lncRNA 通過與miRNA 競爭結合靶基因mRNA 的3'-UTR，間接抑制miRNA 對靶基因的負向調控；2) 某些lncRNA 通過細胞內的剪切作用可形成miRNA 的前體，進而加工生成特異miRNA，調控靶基因的表達進而發揮功能；3) 個別lncRNA 可發揮內源性miRNA 海綿的功能，抑制miRNA的表達。因此，整合分析miRNA-lncRNA-mRNA之間的調控關系能夠更全面的闡述疾病的發生和發展。

 

　　2技術路線及方法：

　　實驗驗證

 

　　Real-time PCR驗證差異表達的miRNA, lncRNA和mRNA。

 

　　雙熒光素酶報告基因驗證miRNA與其靶基因的相互作用

 

　　樣本要求:每組樣本不少3個。

 

　　mRNA測序：RNA樣品總量: ≥1.5 μg；RNA樣品濃度: ≥50 ng/μL

 

　　microRNA測序：RNA樣品總量: ≥3 μg；RNA樣品濃度: ≥200 ng/μL

 

　　lncRNA測序：RNA樣品總量: ≥3 μg；RNA樣品濃度: ≥100 ng/μL